研制針對(duì)特殊細(xì)胞系或原代培養(yǎng)的無(wú)血清培養(yǎng)基主要有兩種方法.第一種方法是找到一個(gè)相關(guān)細(xì)胞類型的培養(yǎng)基已知配方,加入或不加10%~20%的透析血清,在減少血清的同時(shí),逐一或成組的改變培養(yǎng)基成分直到培養(yǎng)基達(dá)到你所特殊需要的最佳條件.這種方法最初由Ham及其同事[Ham,1984]采用,通常能提供最佳培養(yǎng)條件.如果發(fā)現(xiàn)一組成分對(duì)血清的減少起到補(bǔ)充的作用,那就通過(guò)單種成分的逐步逐一刪除將這一活性成分從中篩選出來(lái)然后尋找其最佳濃度[Ham,1984].當(dāng)然,這是一項(xiàng)耗時(shí)而繁雜的工作,包括繪制細(xì)胞生長(zhǎng)的生長(zhǎng)曲線,每個(gè)階段做克隆生長(zhǎng)分析,找到一種適合新細(xì)胞類型的新培養(yǎng)基至少要三年時(shí)間.
由于第一種方法耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng),使人們想到了第二種方法:對(duì)現(xiàn)在培養(yǎng)基,如RP-MI1640或DMEM與Ham’s F12的聯(lián)合培養(yǎng)基加以補(bǔ)充,而且將加入成分的種類限制在一個(gè)較小的范圍內(nèi),僅包括硒,轉(zhuǎn)鐵蛋白,白蛋白,胰島素,氫化可的松,雌激素,三磺甲狀腺氨酸,乙醇胺,磷酸乙醇胺,生長(zhǎng)因子(EGF,FGF,PDGF,內(nèi)皮生長(zhǎng)添加物等),前列腺素和其他有特殊功能的物質(zhì).通常對(duì)多數(shù)細(xì)胞而言,硒,轉(zhuǎn)鐵蛋白,胰島素都很重要,但對(duì)其他成分的需求則差別較大.

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