服務名稱: NF-KB p65活性檢測實驗
規(guī)格: 實驗服務
價格： 200元
收費標準/服務周期/提供結(jié)果:
歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。
更多實驗技術(shù)服務請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詳詢!
NF-KB p65活性檢測實驗
核轉(zhuǎn)錄因子NF-kappaB (NF-kB) 是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控多種與炎癥、抗凋亡、
腫瘤形成和轉(zhuǎn)化有關(guān)的基因表達。NF- kappaB (NF _kB)最初被鑒定為在B細胞中和免疫球蛋白k輕鏈的增強子結(jié)合。但隨后在非B-細胞的細胞質(zhì)中被發(fā)現(xiàn)，形成NF-KB和kB的復合物。最初在DNA結(jié)合蛋白復臺物中分離的NF -kB是由p65(ReIA)和p50構(gòu)成的異源雙聚體。其他分離的單體包括p49 (也可稱為p52) , p75 (C-Rel) ,p68(ReIB)。 p65,p68，p75單體起反式激活作用。p50, p49 (p52) 單體具有DNA結(jié)合活力，但只具有微量的反式激活作用。據(jù)報道p49和NF-kB的單體p65形成具有轉(zhuǎn)錄活力的異源雙體，類似于p50/ p65異源雙體。p49/ p65和p50/ p65異源雙體在細胞質(zhì)中受一種叫kBa/MAD-3的抑制劑調(diào)節(jié)。
IkB和p65單體結(jié)合，阻制了細胞核中的定位和DNA的結(jié)合。在體外高濃度的p65能形成同源雙聚體，能和DNA微弱地結(jié)合。Poly(dl:dC)能抑制這一 反應 。p49和p50也能形 成同源雙聚體，但在細胞中的濃度很低。通常,在作NF-KB的凝膠遷移實驗時,在20ul的反應體積中，有溶于10 mM HEPES的0.28pmoles的NF -kB9寡核苷酸(pH7.9), 50mMKCI, 0.2mMEDTA, 2.5mM DTT, 10%甘油，0.05%NP-40。當用純化的蛋白時，250-300ng足以形成凝膠遷移復合物， 而需用10ug的Hel a細胞核抽提物。凝膠遷移復合物在室溫中保溫30分鐘，在50mMTris(pH8 3)和38mM甘氨酸的7%聚丙烯酰胺凝膠電泳中分離凝膠遷移復合物。含考馬斯蘭和二甲苯藍色素的加樣溶液只能加入到陰性對照反應中，因這兩種色素會加劇NF-kB復合物的解離。當用Hel a細胞核抽提物作為結(jié)合蛋白來源時，可形成兩種序列特異的凝膠遷移復合物，即p50/p50同源雙聚體和p50/ p65異源雙聚體。在表達p49，p50, p65的細胞中， 可檢測到4個序例特異的凝膠遷移復合物(p49/ p49，p50/ p50，p50/ p65，p49/ p65)，如果存在高濃度的p65，可檢測到微量的p65/p65.
下列試劑可加強NF- kB在體外的結(jié)合: mM的GTP, ATP, 精胺，亞精胺,鋇或鈣離子，ng的
Co+3(NH3)6 (12) 。提取組織或細胞核蛋白，利用不同形式的NF -Kb p65抗體捕獲細胞核蛋白并加以區(qū)分,通過酶標儀450nm處測定核蛋白標準品與NF -Kb p65吸光度值，進行定量比較,從而明確目的蛋白的活化度。
從2011年開始我們致力于在生命科學領(lǐng)域、生物醫(yī)學實驗外包及論文潤色服務，協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
實驗代做：
%E5%B0%8F%E5%9B%BE_1.jpg)
%E5%B0%8F%E5%9B%BE.jpg)
客服01